2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Premezcla PCR rápida con alta eficiencia e alta resistencia ao estrés.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ é unha premezcla 2 × PCR lista para usar recentemente optimizada e actualizada con todas as partes esenciais na reacción de PCR excepto o molde de ADN e os cebadores.

Cat. Non	Tamaño do envase
4993001	1 ml
4993002	5x1ml
4992912	20x5x1 ml
4992913	5 × 1 ml
4992920	20 × 5 × 1ml
4992921	20 × 5 × 1ml

Envíanos un correo electrónico

Detalle do produto

Exemplo experimental

FAQ

Etiquetas do produto

características

■ Alta eficiencia de amplificación: fragmentos de ADN de diferentes tamaños (inferiores a 5 kb) e fontes pódense amplificar de xeito eficiente.
■ Alta sensibilidade: pódense amplificar ata 10 pg de fragmentos diana a partir de modelos xenómicos.
■ Alta resistencia á tensión: para plantillas con alto contido de impurezas como plantilla / cultivo bacteriano extraído en bruto, o fragmento obxectivo pode amplificarse facilmente. A actividade da polimerase non se verá afectada pola conxelación e desconxelación repetidas.
■ Conveniente para aplicacións: o sistema de reacción preparouse con facilidade e rapidez. O fragmento amplificado contén o saínte dA do extremo 3 ′, que é conveniente para a clonación de TA.

Especificación

Tipo: Taq ADN polimerase
Mostra: Plantilla purificada / extraída en bruto / cultivo bacteriano
Modelo: > 10 páx
Tamaño do fragmento: <5 kb
Aplicacións: Amplificación por PCR de fragmentos de ADN, etiquetaxe de ADN, extensión de cebador, determinación de secuencias, detección de xenes a grande escala, experimentos de PCR semi-cuantitativos, detección de ADN traza, etc.

Todos os produtos pódense personalizar para ODM / OEM. Para máis detalles,faga clic en Servizo personalizado (ODM / OEM)

Anterior: 2 × Mix PCR rico en GC

Seguinte: Golden Easy PCR System (con colorante)

Figura 1. Os modelos de diferentes fontes foron amplificados por TIANGEN Taq MasterMix II e a Taq Mix común do provedor TR respectivamente para detectar a resistencia á tensión dos reactivos. Os resultados mostran que os produtos TIANGEN poden amplificar os fragmentos obxectivo de modelos xenómicos e cultivos bacterianos brutos e a resistencia ao estrés é mellor que a do provedor TR. A: Plantilla xenómica bruta extraída por TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit. Prp / DN: extracción de cru e detección de mostras de sangue humano. Arroz: extracción de cru e detección de mostras de arroz. B: Colonia PCR. O fragmento PCR é de 700 pb.
M: TIANGEN Marker III

Boa universalidade para modelos de diferentes fontes e con diferentes lonxitudes
Figura 2. Amplificáronse fragmentos de diferentes fontes e lonxitudes usando TIANGEN Taq MasterMix II (A) e ordinario Taq Mestura de provedor de CC.TT (B), provedor TR (C), provedor V (D) e provedor G (E) respectivamente. Os resultados mostran que o rendemento integral dos produtos TIANGEN é o mellor en termos de capacidade de amplificación, especificidade e universalidade.M: TIANGEN Marker III1: Plantilla de ADN xenómico de soia (120 pb);

2-3: plantilla de ADN xenómico do arroz (694 pb, 2258 pb);

4: plantilla de ADN xenómico de algodón (200 pb);

5: Escherichia coli plantilla de ADN xenómico (2298 pb);

6-7: plantilla de ADN do xenoma do rato (1 kb, 2 kb);

8-10: modelo de ADN xenómico de rata (1 kb, 2 kb, 2080 pb);

11-18: plantilla de ADN do xenoma humano (300 pb, 448 pb (GC%: 74,8%), 1100 pb, 750 pb,

1000 pb, 1090 pb (GC%: 70,4%), 2 kb, 4 kb)

Alta sensibilidade
Figura 3. Amplificáronse diferentes concentracións de fragmentos de ADN de rata e humanos usando TIANGEN Taq MasterMix II (A), ordinario Taq Mestura de Provedor V (B) e Proveedor de CC (C), respectivamente, para detectar a sensibilidade de amplificación. Os resultados mostran que o produto TIANGEN podería amplificar o fragmento obxectivo da plantilla do xenoma tan baixo como 0,01 ng e a súa sensibilidade é mellor que a dos produtos do Provedor V e TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate input 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng.

P: Non hai bandas de amplificación

Modelo A-1

■ O modelo contén impurezas de proteínas ou inhibidores de Taq, etc. —Purificar o modelo de ADN, eliminar as impurezas de proteínas ou extraer o ADN modelo con kits de purificación.

■ A desnaturalización do modelo non está completa - Aumentar adecuadamente a temperatura de desnaturalización e prolongar o tempo de desnaturalización.

■ Degradación do modelo: prepara de novo o modelo.

Imprimación A-2

■ Mala calidade dos cebadores ——Resintetiza o cebador.

■ Degradación de imprimación ——Aliquot os cebadores de alta concentración en pequeno volume para a súa conservación. Evite a conxelación e desconxelación múltiple ou crioconservación a longo prazo de 4 ° C.

■ Deseño inadecuado dos cebadores (por exemplo, a lonxitude do cebador non é suficiente, o dímero formado entre os cebadores, etc.).

A-3 Mg²⁺concentración

■ Mg²⁺ a concentración é demasiado baixa —— Aumentar adecuadamente Mg²⁺concentración: Optimizar o Mg²⁺ concentración por unha serie de reaccións de 1 mM a 3 mM cun intervalo de 0,5 mM para determinar o Mg óptimo²⁺ concentración para cada modelo e cartilla.

A-4 Temperatura de recocido

■ A alta temperatura de recocido afecta á unión da imprimación e do molde. ——Reducir a temperatura de recocido e optimizar o estado cun gradiente de 2 ° C.

A-5 Tempo de ampliación

■ Tempo de extensión curto —— Aumentar o tempo de extensión.

P: Falso positivo

Fenómenos: as mostras negativas tamén mostran as bandas de secuencia obxectivo.

A-1 Contaminación de PCR

■ Contaminación cruzada de produtos de amplificación ou de secuencia diana ——Para non pipetar con precaución a mostra que contén a secuencia diana na mostra negativa nin derramalos fóra do tubo da centrífuga. Os reactivos ou equipos deben ser autoclavados para eliminar os ácidos nucleicos existentes e a existencia de contaminación debe determinarse mediante experimentos de control negativo.

■ Contaminación dos reactivos ——Aliquote os reactivos e almacénelos a baixa temperatura.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ a concentración é demasiado baixa —— Aumentar adecuadamente Mg²⁺ concentración: Optimizar o Mg²⁺ concentración por unha serie de reaccións de 1 mM a 3 mM cun intervalo de 0,5 mM para determinar o Mg óptimo²⁺ concentración para cada modelo e cartilla.

■ Deseño de cebador incorrecto e a secuencia diana ten homoloxía coa secuencia non diana. —— Cebadores de redeseño.

P: Amplificación non específica

Fenómenos: as bandas de amplificación de PCR son incompatibles co tamaño esperado, grande ou pequeno, ou ás veces prodúcense ambas bandas de amplificación específicas e bandas de amplificación non específicas.

A-1 Imprimación

■ Mala especificidade da imprimación

—— Imprimación de redeseño.

■ A concentración de imprimación é demasiado elevada —— Aumenta adecuadamente a temperatura de desnaturalización e prolonga o tempo de desnaturalización.

A-2 Mg²⁺ concentración

■ O Mg²⁺ a concentración é demasiado alta ——Reducir adecuadamente a concentración de Mg2 +: Optimizar o Mg²⁺ concentración por unha serie de reaccións de 1 mM a 3 mM cun intervalo de 0,5 mM para determinar o Mg óptimo²⁺ concentración para cada modelo e cartilla.

A-3 Polimerase termoestable

■ Cantidade excesiva de encima ——Reducir a cantidade de enzima adecuadamente a intervalos de 0,5 U.

A-4 Temperatura de recocido

■ A temperatura de recocido é demasiado baixa: aumenta axeitadamente a temperatura de recocido ou adopta o método de recocido en dúas etapas.

A-5 ciclos de PCR

■ Demasiados ciclos de PCR ——Reducir o número de ciclos de PCR.

P: Bandas irregulares ou manchas

A-1 Imprimación——Pobre especificidade ——Deseña de novo a imprimación, cambie a posición e a lonxitude da imprimación para mellorar a súa especificidade; ou realizar PCR aniñada.

Modelo ADN A-2

——A plantilla non é pura ——Purifica a plantilla ou extrae ADN con kits de purificación.

A-3 Mg²⁺ concentración

——Mg²⁺ a concentración é demasiado alta ——Reducir adecuadamente Mg²⁺ concentración: Optimizar o Mg²⁺ concentración por unha serie de reaccións de 1 mM a 3 mM cun intervalo de 0,5 mM para determinar o Mg óptimo²⁺ concentración para cada modelo e cartilla.

A-4 dNTP

——A concentración de dNTP é demasiado alta ——Reduce a concentración de dNTP adecuadamente

A-5 Temperatura de recocido

——Temperatura de recocido demasiado baixa—— Aumentar adecuadamente a temperatura de recocido

Ciclos A-6

——Moitos ciclos ——Optimiza o número de ciclos

P: Canto ADN modelo debe engadirse nun sistema de reacción de PCR de 50 μl?

P: Como amplificar fragmentos longos?

O primeiro paso é escoller a polimerase axeitada. A polimerase Taq regular non pode revisarse debido á falta de actividade de exonucleasa 3'-5 ', e o desaxuste reducirá moito a eficiencia de extensión dos fragmentos. Polo tanto, a polimerase Taq regular non pode amplificar con eficacia fragmentos diana maiores a 5 kb. A taq polimerase con modificación especial ou outra polimerase de alta fidelidade debe seleccionarse para mellorar a eficiencia da extensión e satisfacer as necesidades de amplificación de fragmentos longos. Ademais, a amplificación de fragmentos longos tamén require un axuste correspondente do deseño da imprimación, o tempo de desnaturalización, o tempo de extensión, o pH do tampón, etc. Normalmente, os imprimadores con 18-24 pb poden levar a un mellor rendemento. Para evitar danos na plantilla, o tempo de desnaturalización a 94 ° C debería reducirse a 30 segundos ou menos por ciclo e o tempo para subir a temperatura a 94 ° C antes da amplificación debería ser inferior a 1 min. Ademais, establecer a temperatura de extensión a uns 68 ° C e deseñar o tempo de extensión segundo a velocidade de 1 kb / min pode garantir unha amplificación efectiva de fragmentos longos.

P: Como mellorar a fidelidade de amplificación da PCR?

A taxa de erro da amplificación por PCR pode reducirse empregando varias ADN polimerasas con alta fidelidade. Entre todas as ADN polimerases de Taq atopadas ata o momento, o encima Pfu ten a taxa de erro máis baixa e a fidelidade máis alta (ver táboa adxunta). Ademais da selección de encimas, os investigadores poden reducir aínda máis a taxa de mutación da PCR optimizando as condicións de reacción, incluíndo a composición do tampón, a concentración de polimerase termoestable e o número de ciclos de PCR.

Escribe aquí a túa mensaxe e mándana